REAçãO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR): DESCRIçãO DO MéTODO

Reação em cadeia da polimerase (PCR) é a criação de várias cópias de uma pequena seção do DNA humano. Uma pequena quantidade de material fisiológico é necessária para pesquisa e obtenção de resultados: escarro, sangue, líquido amniótico, saliva, urina, etc.

O que é uma reação em cadeia da polimerase?

O método de PCR foi desenvolvido pelo cientista americano Melison, que em 1998 recebeu o Prêmio Nobel pelo seu desenvolvimento. Ativamente usado:

com o diagnóstico precoce de infecções, patologias oncológicas;
em um exame forense para o estudo de uma quantidade extremamente pequena de DNA;
em medicina veterinária, biologia, genética molecular;
para identificação pessoal por DNA;
confirmar a paternidade;
em ecologia, por exemplo, ao rastrear a qualidade do produto, em antropologia.

Quem é prescrito PCR?

A reação em cadeia da polimerase no diagnóstico de patologias infecciosas é um dos métodos mais confiáveis que fornece a análise mais precisa e confiável. Por exemplo, a confiabilidade da análise da clamídia está próxima de 100%. Na maioria das vezes, essa medida diagnóstica é prescrita a pacientes que, durante o teste, têm dificuldade em identificar um determinado patógeno.

Testes de laboratório de PCR usar:

Para procurar por organismos patogênicos que causam infecção do trato urinário e genital, é difícil identificar quando se aplica culturas ou método de imunologia.
Para re-análise do HIV na fase inicial com um resultado positivo, mas questionável da análise inicial, por exemplo, em recém-nascidos de pais infectados.
Estabelecer patologia oncológica em um estágio inicial e para correção individual do regime de tratamento em pacientes.
Para detecção precoce e tratamento potencial de patologias hereditárias. Assim, muitos futuros pais estão testando para descobrir se são portadores de doenças genéticas. Em crianças, esse método determina a probabilidade de exposição a doenças herdadas.

Além disso, esta técnica é usada:

para a detecção de patologia fetal no início da gravidez;
em pacientes antes da cirurgia para transplante de órgãos - necessário para determinar a compatibilidade dos tecidos
detectar patógenos perigosos no sangue do doador;
em recém-nascidos para detectar infecções ocultas;
avaliar os resultados do tratamento antiviral ou antimicrobiano.

Por que passar por esse procedimento?

Como a PCR é considerada um método de diagnóstico altamente eficaz que dá quase 100% de resultados, este procedimento é usado:

Para confirmar ou excluir o diagnóstico.
Para uma avaliação rápida da eficácia do tratamento.
Em muitos casos, esse método é considerado a única maneira possível de detectar patologias em desenvolvimento, se outras técnicas virológicas bacteriológicas se revelarem inúteis.
Vírus usando o procedimento de PCR são detectados imediatamente após a infecção e antes do início dos sintomas principais.
A detecção precoce de microorganismos permitirá o tratamento imediato.

Além disso, a análise de PCR permitirá detectar rapidamente um pequeno número de microrganismos em amostras vivas ou mortas. Portanto, esta técnica é usada para procurar um organismo patogênico específico, por exemplo, um bacilo da tuberculose.

Além disso, a análise de PCR é usada:

determinar a sensibilidade do DNA a tipos específicos de antibióticos, o que permitirá o mais rápido possível iniciar o tratamento;
controlar a propagação de epidemias;
para identificar e rastrear novos tipos de micróbios, patógenos.

Os principais tipos de PCR

Método padrão

A análise de PCR é realizada com base na duplicação múltipla de um fragmento de ADN específico e ARN utilizando as enzimas iniciadoras. Graças a isso, o pesquisador recebe a quantidade necessária de material.

PCR em tempo real

Neste tipo de pesquisa, o processo de identificação de um determinado fragmento é iniciado após passar por cada ciclo. Esse tipo de pesquisa permite obter informações sobre o número de vírus e microrganismos no organismo, ou seja, realizar uma análise quantitativa.

Modo de Transcrição Reversa de PCR

Esta análise é utilizada para pesquisar RNA de cadeia simples para a detecção adicional de vírus cuja base genética é denominada RNA. Por exemplo, este é o vírus da hepatite C, imunodeficiência e assim por diante. Na realização deste estudo, uma enzima especial é usada, graças à qual o DNA de fita simples é construído. O sistema restaura a segunda cadeia de DNA e executa o procedimento tradicional.

Indicações para

O procedimento de PCR é utilizado nas clínicas de doenças infecciosas, obstetrícia, urologia, ginecologia e nefrologia, pediatria e assim por diante. As indicações mais comuns para análise de atribuição são as seguintes:

determinar o risco de desenvolver anormalidades genéticas em uma criança na presença de patologias hereditárias;
diagnosticar ambos os pais ao planejar uma gravidez ou quando a mãe está em uma condição difícil enquanto carrega uma criança;
com as dificuldades de concepção para identificar as causas da infertilidade;
em caso de suspeita de infecções sexuais na fase aguda ou em risco de sua transição para o estágio crônico;
detectar as causas de processos inflamatórios de origem desconhecida;
com sexo casual desprotegido;
determinar a sensibilidade de um microorganismo patogênico a um medicamento específico;
suspeita de infecção latente para detectar patógenos sem sintomas óbvios;
para confirmar a recuperação de uma doença, isto é, um diagnóstico retrospectivo.

Além disso, a PCR é usada quando é necessário identificar com precisão os patógenos como: vírus da hepatite, imunodeficiência humana, citomegalovírus, vírus herpes simplex, vírus da rubéola, vírus do papiloma.

Lá, este método é usado para determinar infecções: mononucleose infecciosa, encefalite transmitida por carrapatos, candidíase, que é causada por fungos candida, infecções genitais e tuberculose.

Se contra-indicações e método seguro?

Uma vez que este procedimento é realizado sem qualquer impacto no corpo, e apenas material biológico é utilizado, o qual é levado para a pesquisa, não há contra-indicações devido à ausência de perigo potencial para o corpo. Mas, por exemplo, a amostragem de biomateriais do canal cervical do útero não é realizada após uma colposcopia. Esfregaço de entrega, raspagens são permitidas apenas 4-7 dias após o final da menstruação e a cessação completa da descarga.

Características de preparação para o procedimento

Como amostra para análise de PCR, na qual o DNA de um patógeno estranho é detectado, é utilizado um fluido ou tecido biológico. A ingestão da substância teste ocorre na forma de amostragem de sangue de uma veia, uma raspagem da cavidade nasal, laringe, colo do útero, uretra. Antes do procedimento diagnóstico, o médico deve explicar ao paciente qual material será coletado:

na análise das infecções por herpes, a mononucleose toma uma análise da urina, bem como um esfregaço da faringe;
ao testar para hepatite ou toxoplasmose, o sangue é retirado de uma veia;
para diagnosticar vários tipos de danos no SNC, o líquido cefalorraquidiano é retirado;
na pneumologia, as amostras para análise de PCR são líquido pleural e escarro;
Se realizar um estudo de infecções intra-uterinas durante a gravidez, líquido amniótico, as células da placenta são usadas para análise.

A confiabilidade e a precisão do resultado dependem da esterilidade e das condições de uso do biomaterial. Como os estudos de PCR são altamente sensíveis, qualquer contaminação da substância tomada pode distorcer os resultados. A preparação competente para a entrega do biomaterial não apresenta dificuldades para o paciente.

Mas há várias recomendações:

ao analisar infecções sexualmente transmissíveis, é necessário excluir contatos íntimos três dias antes da entrega do material;
72 horas devem interromper o uso de qualquer preparo vaginal;
a partir da noite do dia anterior, nenhuma higiene das áreas estudadas pode ser realizada
3-4 horas antes de retirar uma amostra da uretra, a micção deve ser excluída;
um mês antes de fazer os testes, você precisa parar de tomar antibióticos;
o sangue é dado de manhã com o estômago vazio antes de comer e beber;
A urina da manhã é coletada em um recipiente estéril depois de ir ao banheiro.

Como é a PCR?

Ao realizar pesquisas em um reator especial, um certo ciclo se repete:

O primeiro passo. Desnaturação. Saliva, sangue, testes ginecológicos e outras substâncias são colocadas no aplicador, onde o material é aquecido e o DNA é dividido em duas cadeias.
O segundo passo. Resfriamento leve da substância ingerida, adicionando-lhe componentes especiais que reconhecem as partes necessárias da molécula de DTC e se ligam a ela.
3 passos Alongamento Durante o processo, um fragmento de DTC do organismo patogênico é completado, uma cópia dele é formada. Este ciclo é repetido, o que duplica a cópia do fragmento de DNA específico.

Em algumas horas, muitas cópias desse fragmento são formadas e sua presença nas amostras é revelada. Em seguida, os resultados são comparados com as bases de dados de vários tipos de patógenos. Isso permite determinar o tipo de infecção.

Recursos da análise de decodificação?

O resultado final do estudo será dado ao paciente vários dias após a análise biológica.

Análise qualitativa

Um resultado negativo neste caso significa que nenhum agente infeccioso foi detectado no fluido que foi submetido para teste. Um resultado positivo indica a detecção de vírus ou bactérias patogênicos em uma amostra biológica. Se o resultado foi positivo, mas ao mesmo tempo a pessoa não tem sinais de ativação da infecção, tal condição do corpo é chamada portador saudável assintomático.

Na maioria das vezes, isso é observado quando se toma o biomaterial em patologias virais. Neste caso, o tratamento não é necessário, mas requer supervisão médica constante. Desde que sob tais condições há uma probabilidade:

a propagação do vírus do portador para pessoas saudáveis;
ativação do processo e a transição da patologia para a forma crônica.

Análise quantitativa

O resultado quantitativo é determinado por um especialista especificamente para um tipo específico de infecção. Com base nos resultados obtidos, é possível avaliar o grau de desenvolvimento, o estágio da patologia, que permite prescrever o tratamento o mais rápido possível.